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GUS染色實驗
GUS(β-葡萄糖苷酶)染色實驗是通過檢測β-葡萄糖苷酶活性來研究植物組織中目標基因的表達情況,通常用于研究植物中特定基因的轉錄調控。因為絕大多數植物細胞內不存在內源GUS活性,因此GUS基因被廣泛用作轉基因植物的報告基因。 GUS是一種β-葡萄糖苷酶,能與底物X-葡萄糖苷(X-Gluc)在GUS的作用下被水解,生成可觀察的藍色產物。并且可以與底物4-甲基傘型酮-β-葡萄糖醛酸苷(MUG)反應產生熒光物質4-甲基傘型酮(MU),其含量可由酶標儀測出。因此,我們可以根據單位質量的植物總蛋白在單位時間內產生的熒光物質的多少來定量檢測GUS的含量,進而檢測啟動子的表達強度。
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酵母單雜交(Y1H)
酵母單雜交系統(Yeast one-hybrid system)是一種研究蛋白質和特定DNA序列相互作用的技術方法,酵母單雜交是根據DNA結合蛋白(即轉錄因子)與DNA順式作用元件結合調控報告基因表達的原理。
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雙熒光素酶報告實驗(Dual-LUC)
熒光素酶報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(Firefly lucifer-ase)活性的一種報告系統。 為了減少實驗誤差,同時轉染一個能穩定表達的海腎熒光素酶(Renilla luciferase)的質粒作為內參,催化腔腸素氧化產生藍光,所以叫雙熒光素酶報告基因檢測系統。現已成為研究轉錄因子參與基因調控,以及miRNA和其靶基因互作驗證的有效手段。
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染色質可及性測序(ATAC-seq)
ATAC-seq(Assay for Transposase Accessible Chro-matin with high-throughput sequencing)是一種在全基因組范圍內檢測染色質的開放程度的組學技術,可以得到全基因組范圍內的蛋白質可能結合的位點信息。 其原理是利用轉座酶Tn5容易結合在開放染色質的特性,對Tn5酶捕獲到的DNA序列進行測序。該技術可用于分析開放的染色質區域上可能結合的潛在調控蛋白(如:轉錄因子和輔因子),用此方法與其他方法結合篩查感興趣的特定調控因子。
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